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荧光素酶检测仪器(荧光素酶检测方法)

来源:www.xuniwu.cn   时间:2022-12-14 15:30   点击:193  编辑:admin   手机版

1. 荧光素酶检测方法

虫荧光素酶 luciferase 亦称发光酶。是催化生物发光的酶系的总称。它是光物质的冷水抽提物在氧中发光时,底物虫荧光素被消耗以后残余的对热不稳定的高分子成分。现在对萤虫相海萤以及发光细菌的虫荧光素酶结晶物的研究得最多。它们属于加氧酶(oxygenase),不含金属和辅酶。对于发光,有的酶必须以ATP等作为辅助因子,有的则不需要。其发光机制等已了解到可因种的不同而有很大的差异,虫萤光素酶具有高度的特异性,一般仅作用于来自近缘种的虫荧光素。当然,萤虫、海萤的酶是不能互相代替引起发光的。海萤的虫荧光素酶在干燥状态下相当稳定,可以保存。

萤光生成反应通常分为以下两步:

1:萤光素 + ATP → 萤光素化腺苷酸(luciferyl adenylate) + PPi

2:萤光素化腺苷酸 + O2 → 氧萤光素 + AMP + 光

2. 荧光素酶实验怎么检测荧光

荧光检测法是气相色谱,

荧光检测是一种自然发光反应,通过荧光素酶与 ATP进行反应,可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣,在15秒钟内得到反应结果。光照度通过专用设备进行测量,并以数字形式予以表示,在1975年首先被应用到食品工业中,在1985年在化妆品制造业中得到应用。

3. 荧光素酶检测结果怎么看

哺乳动物细胞中高通量定量萤火虫(Photinus pyralis ) 萤光素酶表达,需要高灵敏度并适应自动化系统连续操作的试剂。Bright-Glo™ Luciferase Assay System(Bright-Glo™ 萤光素酶检测系统) 是专为满足这种需要而设计的均质检测方法,灵敏度高,光信号的半衰期大约为30 分钟,无需对样品进行预处理。这一点也满足了那些样品少,但是仍要求高灵敏度和操作简单的研究人员的需求。

4. 荧光素酶检测方法有哪些

荧光检测仪操作采用生物化学反应方法检测ATP含量,ATP荧光检测仪基于萤火虫发光原理,利用“荧光素酶—荧光素体系”快速检测三磷酸腺苷(ATP)。

ATP拭子含有可以裂解细胞膜的试剂,能将细胞内ATP释放出来,与试剂中含有的特异性酶发生反应,产生光,再用荧光照度计检测发光值,微生物的数量与发光值成正比,由于所有生物活细胞中含有恒量的ATP,所以ATP含量可以清晰地表明样品中微生物与其他生物残余的多少,用于判断卫生状况。

5. 荧光素酶检测方法是什么

荧光素酶互补技术能验证转录因子互作

转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合,这些特异性的序列被称为顺式作用元件,转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

其原理简述如下:

(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。

(2) 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

(3) 加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,产生荧光,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。

6. 荧光素酶检测系统

atp检测可以清晰地表明样品中微生物与其他生物残余的多少,用于判断卫生状况。atp检测是基于萤火虫发光原理,利用荧光素酶荧光素体系快速检测三磷酸腺昔ATP。

ATP是生物的直接能量供体,生命活动所需的能量最终都以ATP的形式来提供。每种生物体内的ATP含量一般都在某一范围内。荧光素是一种在氧气存在的情况下,能氧化发出荧光的分子。

7. 荧光素酶检测方法有几种

酶标仪的使用方法可以参考:

1.开启仪器电源开关,预热5分钟,同时启动电脑。

2.启动Magellan.exe程序,加入程序主界面,仪器微孔板架同时自动打开。

3.将待测微孔板在板架上放好。

4.根据不同的测量要求,设置好测定波长和测量模式后,进行检测

8. 荧光酶免疫测定

一般来说,如果荧光信号比较强的话,建议用黑板。因为荧光需要光源去激发,会引起背景的非特异性激发,而黑色的板壁可以吸收所有折射和反射的杂光。而白色的情况正好相反,可以折射所有的杂光,除非你信号特别弱的时候可以用。

如果你的背景激发不明显的话,黑板有时候和透明板的结果也差不多。而价格上,透明板可能比黑板便宜很多。

9. 荧光法测定酶活性

荧光定量PCR技术,是指在普通PCR技术的基础上,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。主要有两种方法:

1、SYBR Green 染料法

SYBR能够结合到双链DNA上面,当系统中的模板被扩增时,SYBR能够有用结合到新组成的双链上面,跟着PCR的进行,结合的SYBR燃料越来越多,被仪器检测到的荧光信号越来越强,然后到达定量的意图。在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2、TaqMan探针法:

PCR扩增时在参加一对引物的一起参加一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两头分别标记一个陈述荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,陈述基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA恣意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使陈述荧光基团和淬灭荧光基团别离,然后荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,完成了荧光信号的累积与PCR产品形成彻底同步。

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